Kvantificering NAD+ og dets metabolitter i museiskiasnerver

Indførelsen

De afgørende dele af nicotinamid-adenin-dinukleotid (NAD+) og dets metabolitter i aldring og neurodegeneration er blevet bredt anerkendt. For at anspore fremskridt mod biokemisk forskning og interventioner rettet mod aldring og neurodegenerative sygdomme er det af stor betydning nøjagtigt at kvantificere NAD+ og dets metabolitniveauer i NAD+ bjærgningsvejen. Her anvendes en robust og præcis LC-MS/MS-metode til at kvantificere NAD+ og dets metabolitniveauer i normal og skadet iskiasnerve hos mus.

Begrænsninger i eksisterende metoder til kvantificering af NAD+ og dets metabolitter

Traditionelle metoder til kvantificering af NAD+ og dets metabolitter, såsom HPLC-UV, NMR, kapillærzoneelektroforese eller kolorimetriske enzymatiske assays, står over for forskellige udfordringer i følsomhed, selektivitet og indirekte måling. Hvad angår eksisterende LC-MS / MS-assays til cellulære eller vævs- NAD+ og dets metabolitmålinger, er der stadig mange vanskeligheder at overvinde, såsom forlængede driftstider, dårlig kromatografisk retentionsadfærd og utilfredsstillende topformer. Desuden kan kun et til tre stoffer i NAD+ bjærgningsvejen dækkes af disse metoder.

Modifikationerne af LC-MS / MS-metoden

På grundlag af eksisterende LC-MS/MS-assays udføres ændringerne vedrørende kromatografiske betingelser, surrogatmatrix og MS/MS-betingelser. Specifikt anvendes 5 μM methylenphosphonsyre som det mobile faseadditiv, hvilket eksplicit fremmer signalintensiteten og topformen. I betragtning af den relativt rene og enkle karakter af aldrig prøver og deres lille størrelse, testes ultrarent vand som en erstatningsmatrix. I stedet for hydrofil interaktionsvæskekromatografisøjle og hypercarbsøjle anvendes Waters Atlantis Premier BEH C18 AX-søjlen, hvis unikke MaxPeak HPS højtydende overfladeteknologi (passivering af søjlens indre væg, eliminering af metaloverflade) muliggør høj reproducerbarhed, topsymmetri og baseline-adskillelse af alle analysander.Desuden er MS-forholdene optimeret til at minimere NAD + interferenssignalet i den cykliske adenosindiphosphatribose (cADPR) kanal, samtidig med at responsen fra cADPR og nikotinamidmononukleotid (NMN) opretholdes med 4000V til ionsprayspænding, 450 ° C til turbovarmertemperatur, 50 psi til gas 1, 50 psi til gas 2, 30 psi til gardingas og 12 psi til kollisionsgas.

Repræsentativt kromatogram af nerveprøver (normal vs skadet)

Alle fem analysander opnår baselineseparation, hvor cADPR er en følsom biomarkør i neurodegenerationsmodellen. Heri inducerer iskiasnerveakrotomi aksonal degeneration, hvilket fører til reduceret NAD + -niveau og forhøjet NMN -niveau i de skadede nerver, hvilket resulterer i ca. 2 gange stigning i NMN / NAD + -forholdet. Samtidig reduceres niveauerne af nikotinamid (NAM) og adenosindiphosphatribose (ADPR) med ca. 2 gange, mens cADPR-niveauet øges med mere end 8 gange. Disse resultater er i overensstemmelse med resultaterne af tidligere rapporteret forskning, der verificerer nøjagtigheden af denne modificerede LS-MS/MS-metode til kvantificering af NAD+ og dets metabolitter.

Konklusion

Denne modificerede LC-MS/MS-metode muliggør effektiv baseline-adskillelse af NAD+, NMN, NAM, ADPR og cADPR inden for en kort runtime på 5 min, hvilket bidrager til tidlige diagnoser af forskellige neurologiske lidelser og lægemiddeludvikling til aldring og neurodegenerative sygdomme.

Henvisning

Ma Y, Deng L, Du Z. Udvikling og validering af en LC-MS/MS-metode til kvantificering af NAD+ og relaterede metabolitter i mus' iskiasnerver og dens anvendelse på en dyremodel for nerveskader. J Chromatogr A. doi:10.1016/j.chroma.2024.464821

BONTAC NAD

BONTAChar været dedikeret til forskning og udvikling, fremstilling og salg af råvarer til coenzym og naturlige produkter siden 2012 med selvejede fabrikker, over 170 globale patenter samt et stærkt F & U-team. BONTAC har rig F&U-erfaring og avanceret teknologi inden for biosyntese afNAD og dets forløbere(f.eks. NMN og NR). Der er forskellige typer NAD, der skal vælges, der omfatter NAD ER-grad (fjernelse af endoxin), NAD klasse I (IVD / kosttilskud / kosmetik råpulver), NAD klasse II (API / mellemprodukter) og NAD grad IV (hvis der er højere krav til opløselighed), som kan leveres i form af frysetørret pulver eller krystallinsk pulver. Renheden af BONTAC NAD kan nå over 98%.

Ansvarsfraskrivelse

Denne artikel er baseret på referencen i det akademiske tidsskrift. De relevante oplysninger gives kun til delings- og læringsformål og repræsenterer ikke nogen medicinsk rådgivning. Hvis der er nogen overtrædelse, bedes du kontakte forfatteren for sletning. De synspunkter, der kommer til udtryk i denne artikel, repræsenterer ikke BONTAC's holdning. BONTAC kan under ingen omstændigheder holdes ansvarlig eller erstatningspligtig for krav, skader, tab, udgifter eller omkostninger, der direkte eller indirekte skyldes din tillid til oplysningerne og materialet på dette websted.