En videnskabelig metode til kvantificering af NMN i biologiske prøver
1. Indledning
Tilskud af nikotinamidmononukleotid (NMN) at opregulere niveauet af nikotinamidadenindinukleotid (NAD+) er blevet afsløret som en lovende anti-aging intervention. Det er dog stadig en alvorlig udfordring at kvantificere NAD+-mellemprodukter nøjagtigt, NMN navnlig. Denne undersøgelse har til formål at introducere en ny metode, dobbeltisotopmedieret LC-MS/MS-metode (dimeLC-MS/MS), til præcis kvantificering af NMN i biologiske prøver.
2. Faktorer, der påvirker den nøjagtige detektion af NMN
NMN er svært at detektere nøjagtigt på grund af dets sårbarhed over for enzymatisk nedbrydning, konvertering i prøvebehandling, dets komplekse adfærd under forskellige kolonne- og ekstraktionsforhold samt matrixeffekt.
Specifikt har NMN egenskaberne høj polaritet og lav flygtighed, som er let at opløse i vand, men vanskelig at opløse i organiske opløsningsmidler. Disse egenskaber begrænser i høj grad anvendelsen af mange konventionelle kvantitative analysemetoder.
Biologiske prøver såsomblod har signifikante aktiviteter af CD38 og CD73 (ecto-5’-nukleotidase), som begge kan bruge NMN som substrat.
NMN's opførsel i kolonnen er meget kompleks, sandsynligvis på grund af den todelte karakter af dets ladninger, så subtile forskelle i ekstraktion og kolonneforhold signifikant påvirker den pålidelige og nøjagtige detektion af NMN.
3. Strategier for håndtering af dimeLC-MS / MSat reducere virkningen af påvirkningsfaktorer
For at undgå interferens fra ovennævnte faktorer anvendes en prototypekolonne NMN-2. Denne kolonne indeholder C18-baserede silicapartikler med høj renhed, som er mere i stand til at binde hydrofile forbindelser end kulstofpartikler, hvilket forbedrer separationsevnen.
Perchlorsyre (PCA) anvendes, da den effektivt kan udvinde NAD+ og NMN fra biologiske prøver såsom plasma med minimale tab.
For at justere for matrixeffekter tilsættes en fast mængde (1 μM) af hver isotopforbindelse til biologiske prøver før PCA-ekstraktionen.
4. Fordelensaf dimeLC-MS/MS
Dobbelte isotopiske NMN-standarder, NMN (M + 14) og NMN (M + 5), i den LC-MS/MS-drevne metode kan præcist spore NMN's skæbne under prøvebehandling, hvilket øger nøjagtigheden og pålideligheden af NMN-måling i biologiske prøver betydeligt. Desuden kan dimeLC-MS/MS evaluere ekstraktionseffektiviteten og de absolutte koncentrationer af NMN i forskellige typer biologiske prøver.
5. Konklusion
Therny LC-MS/MS-drevet metode med dobbelt isotopisk NMN-standarder kan nøjagtigt og pålideligt måle NMN i biologiske prøver.Det kan bruges til fremtidige undersøgelser af NMN-indtag.
6. Henvisning
Unno, Junya et al. "Absolut kvantificering af nikotinamidmononukleotid i biologiske prøver ved dobbelt isotop-medieret væskekromatografi-tandem massespektrometri (dimeLC-MS / MS)." npj aging vol. 10,1 2. 2. jan. 2024, doi:10.1038/s41514-023-00133-1
Hvorfor vælge BONTAC?
BONTAC er førende inden for den globale NMN industri. Vi har den første helenzymkatalyseteknologi i Kina og er blevet den førende virksomhed inden for coenzymprodukter, der er meget udbredt inden for sundhedsindustrien, medicin og skønhed, grønt landbrug, biomedicin og andre områder. Navnlig er BONTAC NMN råvareleverandør af det berømte David Sinclair-team ved Harvard University. Vores tjenester og produkter er troværdige. Desuden BONTAC har et uafhængigt forskningscenter for coenzymteknisk teknologi på provinsniveau i Kina og selvejede fabrikker, hvor produkternes renhed og stabilitet kan sikres.
Ansvarsfraskrivelse
Ther artiklen erbaseret på henvisningen iakademisk tidsskrift. De relevante oplysninger er give Kun til delings- og læringsformål og repræsenterer ikke nogen medicinske rådgivningsformål. Hvis der er tale om en overtrædelse, bedes du kontaktforfatteren forDeletion. De synspunkter, der kommer til udtryk i denne artikel, repræsenterer ikke holdningen hos BONTAC.