Ekstraordinære fordele ved ultrasensitiv ELISA med Thio-NAD-cykling til bestemmelse af Dengue NS1-protein

1. Indledning

Denguefeber er en akut infektionssygdom forårsaget af Dengue-virusgennem bid af en inficeret Aedes-myg (Ae. aegypti eller Ae. albopictus) med de vigtigste symptomer såsom høj feber, svimmelhed, hovedpine, udslæt og Svær gradsmerter (øjen-, muskel-, led- eller knoglesmerter) osv. Denne sygdom er meget udbredt i tropiske og subtropiske klimaer. Det anslås, at 100 til 400 millioner mennesker bliver smittet hvert år, hvor over 80 % normalt er milde og asymptomatiske. Ikke desto mindre kan svær denguefeber øge risikoen for død, hvis den ikke behandles korrekt. Således er tidlig diagnose af denne sygdom vigtig for dens rettidige behandling.

Bemærkelsesværdigt er det, at ikke-strukturelt protein 1 (NS1), et stærkt konserveret glykoprotein, hovedsageligt udskilles under infektionen af Dengue virus, som intensivt anses for at være den vigtigste patogenesefaktor for Denguefeber. Derfor bruges NSI generelt som en biomarkør til tidlig påvisning af denne sygdom.

I denne undersøgelse blev et sandwichenzym-bundet immunosorbent-assay(ELISA)i kombination med thio nicotinamid adenin dinukleotid (thio-NAD/S-NAD) Cykelmetode (i det følgende benævnt ultrasensitiv ELISA) anvendes til at detektere NSI, efterfulgt af sammenligning med NAAT for at bekræfte dens detektionsnøjagtighed.

2. Fordele og ulemper ved traditionelle detektionsmetoder for Denguefeber 

På nuværende tidspunkt er tHer er fire hovedmetoder til detektion for Denguefeber.


Viral isolering og identifikation har høj specificitet, men er tidskrævende og tager mindst 5 dage. Den hurtige antigentest er den hurtigste og mest omkostningseffektive blandt de andre metoder, men sensitiviteten og specificiteten er relativt lav. Serologisk test baseret på IgM og IgG er begrænset af antallet af infektionsdage, da den testen skal udsættes, indtil antistofniveauet stiger til et påviseligt niveau.

I klinikken anvendes NAAT ofte til at bestemme Denguefeberaf snavs af dets høje følsomhed og specificitet. Denne metode er dog dyr, besværlig og tilbøjelig til falsk positivitet, som skal udføres af det uddannede personale. For at overvinde ulemperne ved disse metoder er der indført en ny detektionsmetode ultrasensitiv ELISA er anvendt i denne undersøgelse.

3. Arbejdsgang for ultrafølsom ELISA med thio-NAD-cykling

Et par antistoffer erbruges til at fange NS1-proteinet i sandwich-ELISA og alkalisk fosfatase ermærket på det sekundære antistof. Bortset fra antistofferne er et androsteronderivat, 3a-hydroxysteroid dehydrogenase, thio-NAD og NADH erbruges til at konstruere thio-NAD-enzymets cyklussystem. Under thio-NAD-cyklusreaktionen akkumulerede thio-NADH konstant i et trekantet tal og kunne måles direkte ved en absorbans på 405 nm.

4. Sammenligning af ultrafølsom ELISA og NAAT ved påvisning af Dengue NS1-protein

I NAAT er 60 eksemplarer dengue-positive, og 25 er dengue-negative. NAAT-cyklustærskelværdien (CT) for disse dengue-positive prøver varierede fra 12,42 til 31,41. I den ultrafølsomme ELISA er 59 prøver tilsvarende positive i forhold til NAAT-resultaterne, mens 25 prøver er helt tilsvarende negative i forhold til NAAT-resultaterne.

Sammenlignet med NAAT er sensitiviteten og specificiteten af den ultrafølsomme ELISA henholdsvis 98,3 % og 100 % (tabel 2). Ud af 60 NAAT-bekræftede dengue-positive patientprøver er kun 1 prøve negativ i den ultrafølsomme ELISA. NAAT-dataene viste, at prøven er et type 4 DENV-infektionstilfælde med en CT-værdi på 21,59. Resultaterne af den ultrafølsomme ELISA er næsten helt i overensstemmelse med NAAT-resultaterne med en kappa-værdi på 0,972 (95 % CI: 0,917-1.0).

5. Konklusion

Ultrasensitiv ELISA-metode er nem at udføre og kræver ingen professionelle praktikanter at betjene. Detektionen kan påbegyndes umiddelbart efter modtagelse af en lille prøve. Det er især velegnet til tidlig påvisning af denguefeber i lavindkomstlande.

Henvisning

Chen, Po-Kai et al. "Avanceret detektionsmetode for dengue NS1-protein ved hjælp af ultrafølsom ELISA med Thio-NAD-cykling." Virus vol. 15,9 1894. 8. sep. 2023, doi:10.3390/v15091894

Produktfordele og funktioner i BONTAC Thio-NAD/S-NAD

BONTAC er oaf de få virksomheder i Kinader kan producere Thio-NADmed "Bonzyme"Helenzymatisk metode(miljøvenlig;Ingen skadelige rester af opløsningsmidler) og unik "Bonpure" syv-trins rensningsteknologi. BONTAC integrerer F&U, produktion og salg med Selvejende fabrikker og en række internationale certificeringer for at sikre høj kvalitet og stabil forsyning af produkter.

Ansvarsfraskrivelse

BONTAC påtager sig intet ansvar for eventuelle krav, der direkte eller indirekte opstår som følge af din tillid til oplysningerne og materialet på denne hjemmeside.