Kvantificering NAD+ og dets metabolitter i iskiasnerver hos mus
Indførelsen
De afgørende dele af nicotinamidadenindinukleotid (NAD+) og dets metabolitter i aldring og neurodegeneration er blevet bredt anerkendt. For at anspore til fremskridt mod biokemisk forskning og interventioner rettet mod aldring og neurodegenerative sygdomme er det af stor betydning nøjagtigt at kvantificere NAD+ og dets metabolitniveauer i NAD+-bjærgningsvejen. Her anvendes en robust og nøjagtig LC-MS/MS-metode til at kvantificere NAD+ og dets metabolittniveauer i normal og skadet iskiasnerve hos mus.
Begrænsninger ved eksisterende metoder til kvantificering af NAD+ og dets metabolitter
Traditionelle metoder til kvantificering af NAD+ og dets metabolitter, såsom HPLC-UV, NMR, kapillærzoneelektroforese eller kolorimetriske enzymatiske analyser, står over for forskellige udfordringer inden for følsomhed, selektivitet og indirekte måling. Hvad angår eksisterende LC-MS/MS-analyser til cellulære eller vævs-NAD+ og dets metabolitter, er der stadig mange vanskeligheder at overvinde, såsom forlængede driftstider, dårlig kromatografisk retentionsadfærd og utilfredsstillende topformer. Desuden kan kun et til tre stoffer i NAD+-bjærgningsvejen dækkes af disse metoder.
Ændringerne af LC-MS/MS-metoden
På grundlag af eksisterende LC-MS/MS-analyser udføres ændringerne vedrørende de kromatografiske betingelser, surrogatmatrix og MS/MS-tilstande. Specifikt anvendes 5 μM methylenphosphonsyre som det mobile faseadditiv, som eksplicit fremmer signalintensiteten og topformen. I betragtning af den relativt rene og enkle karakter af aldrig prøver og deres lille størrelse, testes ultrarent vand som en erstatningsmatrix. I stedet for hydrofil interaktion væskekromatografisøjle og hypercarb-søjle anvendes Waters Atlantis Premier BEH C18 AX-søjlen, hvis unikke MaxPeak HPS højtydende overfladeteknologi (passivering af søjlens indervæg, eliminering af metaloverflade) muliggør høj reproducerbarhed, spidssymmetri og baseline-separation af alle analytter.Desuden er MS-forholdene optimeret til at minimere NAD+-interferenssignalet i den cykliske adenosindiphosphat ribose (cADPR) kanal, samtidig med at responsen fra cADPR og nikotinamidmononukleotid (NMN) opretholdes, med 4000V for ionsprøjtespænding, 450°C for turbovarmertemperatur, 50 psi for gas 1, 50 psi for gas 2, 30 psi for gardingas og 12 psi for kollisionsgas.
Repræsentativt kromatogram af nerveprøver (normal vs skadet)
Alle fem analytter opnår baseline-separation, hvor cADPR er en følsom biomarkør i neurodegenerationsmodellen. Heri inducerer iskiasnerveaxotomi aksonal degeneration, hvilket fører til reduceret NAD+-niveau og forhøjet NMN-niveau i de skadede nerver, hvilket resulterer i omkring en 2-dobling af NMN/NAD+-forholdet. Samtidig reduceres niveauerne af nicotinamid (NAM) og adenosindiphosphat ribose (ADPR) med ca. 2 gange, mens cADPR-niveauet øges med mere end 8 gange. Disse resultater er i overensstemmelse med tidligere rapporteret forskning, der verificerer nøjagtigheden af denne modificerede LS-MS/MS-metode til kvantificering af NAD+ og dens metabolitter.
Konklusion
Denne modificerede LC-MS/MS-metode muliggør effektiv baseline-adskillelse af NAD+, NMN, NAM, ADPR og cADPR inden for en kort driftstid på 5 minutter, hvilket bidrager til tidlige diagnoser af forskellige neurologiske lidelser og lægemiddeludvikling til aldring og neurodegenerative sygdomme.
Henvisning
Ma Y, Deng L, Du Z. Udvikling og validering af en LC-MS/MS-metode til kvantificering af NAD+ og relaterede metabolitter i musens iskiasnerver og dens anvendelse på en nerveskadedyremodel. J Chromatogr A. doi:10.1016/j.chroma.2024.464821
BONTAC NAD
BONTAC har været dedikeret til forskning og udvikling, fremstilling og salg af råvarer til coenzym og naturlige produkter siden 2012 med selvejede fabrikker, over 170 globale patenter samt et stærkt R&D-team. BONTAC har rig R&D-erfaring og avanceret teknologi inden for biosyntese af NAD og dets forløbere (f.eks. NMN og NR). Der er forskellige typer NAD, der skal vælges, herunder NAD ER-kvalitet (fjernelse af endoxin), NAD Grade I (IVD/kosttilskud/kosmetikråpulver), NAD Grade II (API/mellemprodukter) og NAD Grade IV (hvis der er højere krav til opløselighed), som kan leveres i form af frysetørret pulver eller krystallinsk pulver. Renheden af BONTAC NAD kan nå over 98 %.
Ansvarsfraskrivelse
Denne artikel er baseret på referencen i det akademiske tidsskrift. De relevante oplysninger er kun til delings- og læringsformål og repræsenterer ikke nogen medicinske rådgivningsformål. Hvis der er nogen overtrædelse, bedes du kontakte forfatteren for sletning. De synspunkter, der kommer til udtryk i denne artikel, repræsenterer ikke BONTAC's holdning. BONTAC kan under ingen omstændigheder holdes ansvarlig eller erstatningspligtig på nogen måde for krav, skader, tab, udgifter eller omkostninger, der direkte eller indirekte opstår som følge af din tillid til oplysningerne og materialet på denne hjemmeside.