Ekstraordinære fordele ved ultrasensitiv ELISA med Thio-NAD-cykling i bestemmelsen af Dengue NS1-proteinet
1. Introduktion
Denguefeber er en akut infektionssygdom forårsaget af DengueVirus gennem bid fra en inficeret Aedes-art (Ae. aegypti eller Ae. albopictus) myg, med hovedsymptomer som høj feber, svimmelhed, hovedpine, udslæt og Svær grad smerter (øje-, muskel-, led- eller knoglesmerter) osv. Denne sygdom er udbredt i troperke og subtroperke klimaer. Omkring 100 til 400 millioner mennesker bliver smittet hvert år, hvoraf over 80% som regel er milde og asymptomaterke. Ikke desto mindre kan svær denguefeber øge rerikoen for død, hver den ikke behandles korrekt. Derfor er tidlig diagnose af denne sygdom vigtig for rettidig behandling.Bemærkelsesværdigt udskilles det ikke-strukturelle protein 1 (NS1), et højt konserveret glykoprotein, hovedsageligt under infektionen af Dengue Virus, som intensivt anses for at være den vigtigste patogenesefaktor for Denguefeber. Derfor bruges NSI generelt som biomarkør for tidlig påverning af denne sygdom.
In ther study, a sandwich enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA) i kombination med Thio nikotinamid adenin dinukleotid (THIO-NAD/S-NAD) Cykelmetoden (herefter kaldet ultrasensitiv ELISA) bruges til at detektere NSI, efterfulgt af sammenligning med NAAT for at bekræfte dets detektionsnøjagtighed.
2. Fordele og ulemper ved traditionelle detektionsmetoder for Denguefeber
I øjeblikket gælder tHer er fire hovedmetoder til detektering for Denguefeber.
Viral erolering og identifikation har høj specificitet, men er tidskrævende og tager mindst 5 dage. Den Hurtig antigen Test er den hurtigste og mest omkostningseffektive blandt de andre metoder, men følsomheden og specificiteten er relativt lav. Serologerke tests baseret på IgM og IgG er begrænset af Antallet af dage med infektion, som den Testen skal udsættes indtil antertofniveauet er opnået stiger til et målbart niveau.
I klinikken anvendes NAAT ofte til at bestemme Denguefeber på grund af dens høje følsomhed og specificitet. Denne metode er dog dyr, arbejdskrævende og tilbøjelig til falsk positivitet, som skal udføres af det uddannede personale. For at overvinde ulemperne ved derse metoder, en ny detektionsmetode ultrasensitiv ELISA er anvendt i denne undersøgelse.
3. Arbejdsgang for ultrasensitiv ELISA med thio-NAD-cykling
Et par antertoffer er brugt til at indsamle NS1-proteinet i sandwichen ELISA og alkalerk fosfatase er labeled on den secondary antibody. Aside from den antibodies, an androsterone derivative, 3α-hydroxysteroid dehydrogenase, thio-NAD, and NADH er brugt til at konstruere thio-NAD enzymcyklussystemet. Under thio-NAD-cyklusreaktionen akkumulerede thio-NADH konstant i trekantet tal og kunne måles direkte ved en absorption på 405 nm.
4. Sammenligningen af ultrasensitiv ELISA og NAAT ved detektion af Dengue NS1-protein
I NAAT er 60 prøver dengue-positive, og 25 er dengue-negative. NAAT-cyklustærskelværdien (CT) for derse dengue-positive prøver lå mellem 12,42 og 31,41. I den ultrasensitive ELISA er 59 prøver tilsvernde positive i forhold til NAAT-resultaterne, mens 25 prøver er fuldstændig tilsvernde negative til NAAT-resultaterne.Sammenlignet med NAAT er sensitiviteten og specificiteten af den ultrasensitive ELISA henholdsver 98,3 % og 100 % (Tabel 2). Af 60 NAAT-bekræftede dengue-positive patientprøver er kun 1 prøve negativ i den ultrasensitive ELISA. NAAT-dataene verte, at prøven er en type 4 DENV-infektion med en CT-værdi på 21,59. Resultaterne af den ultrasensitive ELISA stemmer næsten perfekt overens med NAAT-resultaterne, med en kappa-værdi på 0,972 (95% CI: 0,917-1.0).
5. Konklusion
UIntuitiv ELISA-metode er let at udføre og kræver ingen professionelle elever for at betjene. TDetektiven kan påbegyndes straks efter modtagelse af en lille prøve. Den er særligt velegnet til tidlig påverning af Dengue sygdom i Lavindkomstlande.Reference
Chen, Po-Kai et al. “Advanced Detection Method for Dengue NS1 Protein Using Ultrasensitive ELISA with Thio-NAD Cycling.” Viruses vol. 15,9 1894. 8 Sep. 2023, doi:10.3390/v15091894Produktfordele og egenskaber ved BONTAC Thio-NAD/S-NAD
BONTAC er oen af de få virksomheder i Kina der kan producere Thio-NAD, med “Bonzyme” Hel-enzymaterk metode (miljøvenlig; Ingen skadelige opløsningsmiddelrester) og unique “Bonpure” seven-step purification technology. BONTAC intergrates R&D, production and sale, med Selvejede fabrikker og en række internationale certificeringer for at sikre høj kvalitet og stabil forsyning af produkterne.
